Publicado por el sábado, 12 de diciembre de 2020La prueba de COVID-19 sigue siendo un desafío, ya que cada flujo de trabajo de diagnóstico aparentemente presenta sus propias limitaciones.Las pruebas basadas en antígenos, aunque son las más simples y rentables, hacen más daño que bien, ya que las posibilidades de obtener resultados falsos son mayores.Hasta ahora, solo las pruebas que se basan en la firma (genética) del ácido nucleico (como el ARN en el caso del SARS-CoV-2) se han mantenido más confiables para COVID-19, con RT-qPCR como estándar de oro. En términos simples , las pruebas genéticas para COVID-19 requieren tres pasos esenciales:(1) extracción de ARN de SARS-CoV-2 de las muestras,(2) Amplificación de la señal para aumentar el número de copias de ARN, y(3) Detección del ARN amplificado para proporcionar los resultados de la prueba.Para la amplificación y detección simultáneas de señales, la RT-qPCR es el método más sensible y confiable, pero requiere entornos de laboratorio de alto nivel.Además, las pruebas masivas se ven afectadas por las limitaciones de la cadena de suministro y el tiempo del ensayo RT-qPCR.Otros enfoques que utilizan la amplificación y detección de ARN son la amplificación isotérmica mediada por bucle de transcriptasa inversa (RT) (RT-LAMP) y la amplificación de polimerasa de recombinasa (RT-RPA). Debido a su naturaleza isotérmica, se obtiene una señal relativamente inespecífica que compromete la sensibilidad de la prueba.Pero estos métodos necesitan instrumentos muy pequeños y, por lo tanto, son una mejor opción en entornos con recursos limitados.Otros métodos genéticos disponibles para amplificación y detección simultáneas incluyen CRISPR-Diagnostics.Aparentemente, CRISPR-Diagnostics es la prueba genética más sensible y específica.Los informes científicos emergentes sugieren una sensibilidad de detección aún mejor de estas técnicas que la RT-qPCR debido a un método de detección dual utilizado por esta última.En función de su facilidad de uso y configuración sin instrumentos, la FDA, EE. UU., ha aprobado dos kits basados ​​en CRISPR-Cas para COVID-19.Uno se basa en una técnica llamada DETECTOR (que utiliza la enzima Cas12), y el otro se llama métodos SHERLOCK (que utiliza Cas13).Una plataforma de diagnóstico similar fue desarrollada recientemente por CSIR-IGIB y se denominó FELUDA (utiliza Cas9).DETECTR y SHERLOCK son técnicas sin instrumentos completamente extensas y se han optimizado y validado en una gran cantidad de muestras clínicas de COVID-19.Por lo tanto, mientras que los métodos de amplificación y detección de señales se han hecho más simples y relativamente libres de instrumentos.El principal desafío para acelerar las pruebas es la necesidad de experiencia técnica para recolectar muestras de hisopos (nasofaríngeos y orofaríngeos) y la extracción de ARN de estas muestras.En la actualidad, las pruebas de COVID-19 en India también están aprobadas en muestras de hisopos, que son invasivas e incomodan a los pacientes.Las muestras de hisopos también son propensas a errores de manejo y necesitan medios de recolección como medios de transporte viral para el almacenamiento.En comparación, la saliva es una mejor alternativa con una sensibilidad comparable o mejor que el hisopo.A través de estudios, el uso de saliva para la detección de SARS-CoV-2 ha sido validado científicamente.Por lo tanto, teniendo en cuenta la facilidad de recolección (auto), el mayor volumen de muestra y el almacenamiento gratuito de medios de recolección, la saliva es una muestra de elección mucho mejor que el hisopo para la prueba de COVID-19.Debido a sus muchas ventajas, recientemente la FDA ha aprobado las pruebas basadas en saliva en los EE. UU.Otro hecho interesante asociado con la saliva es que la muestra también se puede utilizar con una configuración mínima del instrumento y sin necesidad de costosos métodos de extracción de ARN.El uso directo de saliva se basa en un simple paso de inactivación por calor para inactivar el virus y el uso de una formulación química simple para liberar el ARN viral para la detección.Estos métodos, llamados flujos de trabajo sin extracción de ARN, se han estandarizado en muestras clínicas de saliva del SARS-CoV-2.Recientemente, la FDA aprobó un método de detección de COVID-19 basado en saliva desarrollado por investigadores de la Universidad de Yale, llamado Saliva Direct.Nuestro grupo de investigación en Jamia Millia Islamia también desarrolló y validó recientemente un método avanzado, que utiliza una formulación química para evitar la interferencia de las mucoproteínas salivales durante la detección del SARS-CoV-2 y tiene resultados a la par con los métodos basados ​​en la extracción de ARN.Estos flujos de trabajo son tan simples y rentables que una persona en casa puede realizar la recolección y el procesamiento de muestras con solo cosas caseras como agua hirviendo para la inactivación por calor y la liberación de ARN.Además, al integrar estos métodos sin extracción de ARN con herramientas de detección sin instrumentos como RT-LAMP, RT-RPA o CRISPR-Diagnostics, está disponible una opción de prueba casera rentable, sensible y que ahorra tiempo.La posibilidad de que muy pronto veamos a gente realizándose estas pruebas en casa como si fuera una prueba de embarazo se está convirtiendo en una realidad.Al igual que un kit de prueba genética en el hogar de 30 minutos de Lucira, este fue aprobado por la FDA de EE. UU. para uso de emergencia.Por lo tanto, al observar muchas ventajas de la saliva sobre el hisopo, India debería permitir la prueba de COVID-19 en muestras de saliva.Independientemente del método de detección utilizado, la saliva es una muestra más favorable para la prueba de COVID-19.(El autor es profesor asistente, Jamia Millia Islamia)